Antibiótico de selección: endotoxina probada, reactivo estéril
La blasticidina es un antibiótico de selección eficiente que actúa tanto en las células eucariotas como en las procariotas.
La blasticidina es un antibiótico peptidil nucleósido aislado de Streptomyces griseochromogenes que inhibe la síntesis de proteínas al interferir con la formación de enlaces peptídicos en la maquinaria ribosómica.
La resistencia a la blasticidina es conferida por el gen de resistencia a la blasticidina de Bacillus cereus (bsr), que codifica para la blasticidina-S desaminasa [1].
La resistencia a la blasticidina también es conferida por el gen de la acetiltransferasa S de blastcidina (bls) de Streptoverticillum sp [2], y el gen de la blasticidina S desaminasa (BSD) de Apergillus terreus [3].
Por lo general, las células de mamíferos son sensibles a las concentraciones de blasticidina de 1-10 μg / ml, y las bacterias a 25-100 μg / ml.
La muerte celular inducida por la blasticidina ocurre rápidamente, lo que permite la selección de líneas celulares transfectadas que transportan un gen de resistencia a la blasticidina en el plazo de una semana.
Referencias:
1. Izumi M. et al., 1991. Gen de resistencia a la blasticidina S (bsr): Un nuevo marcador seleccionable para células de mamíferos. Exp.Cell Res.197:229-33.
2. Pérez-Gonalez J. et al., 1990. Clonación y caracterización del gen que codifica una blasticidina S acetiltransferasa de Streptoverticillum sp. Gen. 86:129-34.
3. Kimura M. et al., 1994. Blasticidina S desaminasa gen de Aspergillus terreus (BSD): un nuevo gen de resistencia a los medicamentos para la transfección de células de mamíferos. Biochim. Biophys. Acta. 1219:653-9.
Características técnicas
Concentración del producto: 10 mg/ml
Control de calidad: Cada lote se prueba a fondo para garantizar la ausencia de variación de lote a lote.
Pureza: ≥ 95% (HPLC)
Nivel de endotoxinas: < 1 UE/mg
Caracterización fisicoquímica: pH, apariencia
Cultivo celular probado: potencia validada en líneas celulares de mamíferos sensibles a la blasticidina y resistentes a la blasticidina
No citotoxicidad de contaminantes traza: ausencia de efectos a largo plazo confirmados en células resistentes a la blasticidina
Contenido
El clorhidrato de blasticidina se suministra como una solución filtrada estéril a 10 mg/ml en tampón HEPES.
Este producto está disponible en cuatro tamaños de envase:
· ant-bl-05: 5 x 1 ml (50 mg)
· ant-bl-1: 10 x 1 ml (100 mg)
· ant-bl-5: 50 x 1 ml (500 mg)
· ant-bl-5b: 1 x 50ml (500 mg)
El clorhidrato de blasticidina también se suministra en polvo:
· ant-bl-10p: 1 g (polvo)
La blasticidina se envía a temperatura ambiente.
Una vez recibido, debe almacenarse a 4 ° C o -20 ° C.
La blasticidina es un compuesto dañino. Consulte la hoja de datos de seguridad para obtener instrucciones de manejo.
CONCENTRACIONES DE TRABAJO
La concentración de trabajo de blasticidina para líneas celulares de mamíferos varía de 1 a 10 μg/ml, en algunos casos hasta 30 μg/ml.
En un experimento inicial, recomendamos determinar las concentraciones óptimas de antibiótico necesarias para matar su línea celular huésped.
Después del tratamiento, la muerte celular ocurre rápidamente, lo que permite la selección de células transfectadas con plásmidos que portan los genes bsr o BSD en tan solo 7 días después de la transfección.
A continuación se enumeran las concentraciones sugeridas de blasticidina para la selección en algunos ejemplos de células de mamíferos.
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Línea celular
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Medio
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Blasticidin conc
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Referencias
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CHO (células ováricas de hámster chino) |
DMEM |
5-10 μg/ml |
1,2 |
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HEK293 (Células renales embrionarias humanas) |
DMEM |
5-15 μg/ml |
3, 4 |
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HeLa (células uterinas humanas) |
DMEM |
2,5-10 μg/ml |
5, 6 |
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Neuro2a ( Neuroblastos de ratón) |
DMEM |
30 μg/ml |
7 |
|
THP-1 ( monocitos humanos) |
RPMI |
10 μg/ml |
8 |
Referencias:
1. Dorgham K. et al., 2009. Un antagonista CX3CR1 diseñado dotado de actividad antiinflamatoria. J Leukoc Biol. 86(4):903-11.
2. Le Bon L. et al., 2014. Las proteínas marginales modulan las interacciones cis y trans del ligando Notch para especificar estados distintivos. eLife Sci, 3:e02950.
3. Tomecki R. et al., 2014. Las mutaciones de hDIS3 asociadas al mieloma múltiple causan perturbaciones en el metabolismo del ARN celular y sugieren el dominio PIN de hDIS3 como un posible objetivo farmacológico. Ácidos nucleicos Res. 42:1270-90.
4. Edbauer D. et al., 2004. La coexpresión de nicastrina y presenilina rescata una pérdida de función mutante de APH-1.J Biol Chem. 279:37311-5.5
. Khandelia P. et al., 2011. Plataforma optimizada para RNAinterferencia y transgénesis de horquilla corta en células de mamíferos cultivadas. PNAS 108:12799-804.
6. Lee HK.et al., 2007. Aplicación de la complementación de la enzima betalactamasa a la detección de alto rendimiento de inhibidores de la señalización del receptor tipo toll. Mol Pharmacol. 72:868-75.7
. Matsumoto G. et al., 2011. La fosforilación de serina 403 de p62/SQSTM1 regula la eliminación autofágica selectiva de proteínas ubiquitinadas. Célula Mol. 44:279-89.8
. Schepetkin IA. et al., 2009.Actividad inmunomoduladora de la enoteína B aislada de Epilobium angustifolium. J Immunol. 183:6754-66.
Preguntas Frecuentes
¿Cuál es el método de almacenamiento preferido para Blasticidin?
La blasticidina se envía a temperatura ambiente. Una vez recibido, debe almacenarse a 4 ° C para el almacenamiento a corto plazo o -20 ° C para el almacenamiento a largo plazo. Evite los ciclos repetidos de congelación-descongelación. La fecha de caducidad se especifica en la etiqueta del producto.
Una vez que se abre la solución de blasticidina, permanece estable durante 1 año a -20 ° C, siempre que evite ciclos repetidos de congelación-descongelación, y se puede mantener a 4 ° C durante 3 meses siempre que se mantiene en condiciones estériles.
Específicamente, para el polvo de blasticidina, la solución madre debe estar en una concentración de 10 mg / ml y las alícuotas se pueden mantener durante 1 año a -20 ° C. Tenga en cuenta que no podemos garantizar la estabilidad del producto si las alícuotas se hacen a menos de 10 mg / ml. Es importante evitar los ciclos repetidos de congelación-descongelación.
¿Cuál es la concentración de selección de blasticidina en células de mamíferos?
La concentración de trabajo de blasticidina para líneas celulares de mamíferos varía entre 1 y 10 μg/ml, con unos pocos casos notificados de hasta 30 μg/ml. En un experimento inicial, recomendamos determinar la concentración óptima de blasticidina requerida para matar su línea celular huésped .
Para obtener información más detallada, consulte la hoja de datos técnicos de este producto.
¿Cuál es la concentración de selección de blasticidina en E. coli?
La blasticidina tiene baja actividad en E. coli, pero los transformadores resistentes a blasticidina se pueden seleccionar en medio de agar LB bajo en sal (pH 8) suplementado con 100 μg / ml de blasticidina.
Tenga en cuenta: un pH alto (es decir, 8) mejora la actividad de blasticidina.
