El kit consiste en una línea celular HEK-Blue PLS, ingenierizada que expresa el gen de tipo toll 4 (TLR4) humano y que permite así, la detección de concentraciones mínimas de endotoxinas (a partir de 0,01 EU/ml).
En presencia de LPS, el TLR4 inicia una cascada deseñalización que conduce a la activación de NF-kB, que en la línea ingenierizada HEK-Blue LPS induce la secreción de SEAP (Secreted embryonic alkaline phosphatase).
La presencia de SEAP en el medio de cultivo se detecta fácilmente gracias al substrato QUANTI-Blue que evidencia una coloración púrpura / azul, que se aprecia fácilmente a simple vista, o se puede medir con un lector de placas a 620-655 nm. Como la absorbancia es directamente proporcional a la cantidad de endotoxinas presentes, la concentración de endotoxinas se calcula con una curva estándar que se obtiene de la dilución serial del estándar HEK-Bluie Endotoxin Standard incluido en el kit (una preparación de E. coli 055:B5 LPS normalizada frente a un control estándar de endotoxina (CSE) aprobados por la FDA).
