Puromycin (solution) de 100 mg (10 x 1 ml) - Invivogen

Antibiótico de selección: test de endotoxinas, reactivo estéril

La puromicina es un antibiótico aminonucleósido producido por Streptomyces alboniger . Inhibe específicamente la transferencia de peptidilo en los ribosomas procarióticos y eucarióticos. Este antibiótico inhibe el crecimiento de bacterias Gram positivas y varias células animales e insectos.

La puromicina también se puede usar en algunas condiciones particulares para la selección de transformantes de E. coli . La resistencia a la puromicina es conferida por el gen Pac que codifica una puromicina N-acetil-transferasa [1]

Las células animales son generalmente sensibles a concentraciones de 1 a 10 µg/ml.

Especificaciones

Concentración del producto: 10 mg/ml

Número CAS : 58-58-2

Control de calidad: cada lote se prueba minuciosamente para garantizar la ausencia de variaciones entre lotes.

Pureza: ≥ 98% (HPLC)

Nivel de endotoxinas: < 5 UE/mg

Caracterización fisicoquímica: pH, apariencia

Cultivo celular probado: potencia validada en líneas celulares de mamíferos sensibles y resistentes a la puromicina

No citotoxicidad de contaminantes traza: ausencia de efectos a largo plazo confirmada en células resistentes a la puromicina

Fórmula: C ₂₂ H ₂₉ N ₇ O ₅ • 2HCl

Peso molecular: 544,3

Estructura :

Contenido

El diclorhidrato de puromicina se suministra como una solución filtrada estéril a 10 mg/ml en tampón HEPES.

Este producto está disponible en tres tamaños de envase:

·       ant-pr-1 : 10 x 1 ml (100 mg)

·       ant-pr-5 : 50 x 1 ml (500 mg)

·       ant-pr-5b : 1 x 50 ml (500 mg)

La puromicina se envía a temperatura ambiente.

Una vez recibido, debe almacenarse a 4 °C o -20 °C.

La puromicina es un compuesto nocivo. Consulte la ficha de datos de seguridad para conocer las instrucciones de manipulación.

Detalles

CONCENTRACIONES DE TRABAJO

Las concentraciones de trabajo de puromicina para líneas celulares de mamíferos oscilan entre 1 y 10 μg/ml.
En un experimento inicial, recomendamos determinar las concentraciones óptimas de antibiótico necesarias para matar la línea de células huésped.
La puromicina mata rápidamente las células eucariotas que no contienen el gen pac. Las células moribundas se separan de las placas, lo que permite una identificación fácil y temprana de los clones transformantes.
Las condiciones de trabajo sugeridas para la selección en algunas células de mamíferos se enumeran a continuación.

Referencias:

1. Furge KA. et al., 2001. Supresión de la tumorigenicidad y metástasis mediadas por Ras a través de la inhibición del receptor de tirosina quinasa Met. PNAS 98:10722-7.
2. Díaz J. et al., 2014. Se requiere Rab5 en las células cancerosas metastásicas para la activación, migración e invasión de Rac1 mejorada con caveolina-1. J Cell Sci. 127:2401-6.
3. Rössger K. et al., 2013. Control de la hipertensión basado en recompensas mediante una interfaz sintética de cerebro y dopamina. PNAS, 110:18150-5.
4. Schmitter D. et al., 2006. Efectos de la regulación negativa de Dicer y Argonaute en los niveles de ARNm en células HEK293 humanas. Ácidos Nucleicos Res. 34:4801-15.
5. Kamer I. et al., 2005. El BID proapoptótico es un efector ATM en la respuesta al daño del ADN Cell. 122:593-603.
6. Charnaux N. et al., 2005. RANTES (CCL5) induce un desprendimiento acelerado dependiente de CCR5 de sindecan-1 (CD138) y syndecan-4 de las células HeLa y forma complejos con los ectodominios desprendidos de estos proteoglicanos, así como con los de CD44. Glicobiología. 15:119-30.

Preguntas frecuentes

¿Cuál es la mejor manera de resuspender Puromicina?
Recomendamos resuspender Puromicina en tampón HEPES (5 mM, pH 7,3)

Hemos notado un precipitado cristalino de Puromicina al descongelar un vial dejado a -20°C, ¿es esto normal?
Sí, durante el almacenamiento se puede formar un precipitado cristalino de puromicina. Si esto ocurre calentar el producto a 37°C por 30 minutos hasta que desaparezca el precipitado cristalino. La formación de un precipitado cristalino no afecta la actividad del producto.

¿Cuál es el método de almacenamiento preferido para Puromicina?
La puromicina se envía a temperatura ambiente. Una vez recibido, debe almacenarse a 4 °C para almacenamiento a corto plazo o -20 °C para almacenamiento a largo plazo. Evite los ciclos repetidos de congelación y descongelación. La fecha de caducidad se especifica en la etiqueta del producto. Una vez abierto permanece estable durante 1 año a -20°C siempre que se eviten ciclos repetidos de congelación-descongelación, y se puede conservar a 4°C durante 3 meses siempre que se mantenga en condiciones estériles.

¿Cuál es la concentración de selección de puromicina en células de mamífero?
La concentración de trabajo de puromicina en líneas celulares de mamíferos varía entre 1 y 10 μg/ml. En un experimento inicial recomendamos determinar la concentración óptima de puromicina requerida para matar su línea de células huésped. Tenga en cuenta que Puromicina mata rápidamente las células eucariotas que no contienen el gen pac.
Para obtener información más detallada, consulte la ficha técnica de este producto.

¿Cuál es la concentración de selección de puromicina en E.coli ?
Puromicina tiene baja actividad en E. coli . Sin embargo, los transformantes resistentes a la puromicina se pueden seleccionar en medio de agar LB, con el pH ajustado a 7,5-8, suplementado con 100-125 μg/ml de Puromicina.